1 本文实验设计构思介绍
作者前期研究表明，补肾中药山茱萸提取物中5-羟甲基糠醛(5-HMF)对叠氮钠、冈田酸、过氧化氢诱导的神经细胞损伤模型有一定的保护作用。为深入研究5-HMF的药理学作用，排除山茱萸提取物中其它成分的干扰，本研究以化学合成的5-HMF用于药理实验。基于已往研究基础，以及对5-HMF相关研究文献的检索，提出假说：5-HMF可能具有脑保护作用,其机制可能与抗氧化应激作用有关。围绕假说，以永久性前脑缺血模型小鼠和前脑缺血/再灌注模型小鼠为研究对象，通过检测小鼠存活时间，探讨5-HMF神经保护作用，并用生化法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，对其作用机制进行阐释。
2 本文创新性
本次实验首次观察到预防性及治疗性给于5-HMF可以延长前脑缺血模型小鼠存活时间，其机制可能与抗氧化应激，提高脑组织清除自由基的酶活力有关。
检索结果：
数据库：PUBMED
以5-hydroxymethyl-2-furfural，forebrain ischemia为检索词，检索文献 0篇。
数据库：中国知网
以5-羟甲基糠醛，脑缺血为检索词，检索文献1篇。
此篇文献为作者所在科室前期试验结果，主要探讨了5-羟甲基糠醛对脑缺血再灌模型小鼠认知功能的影响。
以上结果可显示本实验创新性。
3 本文与其他同类研究的比较
本实验首次以5-羟甲基糠醛为干预手段，预防性及治疗性干预前脑缺血模型小鼠。观察到预防性及治疗性给于5-羟甲基糠醛可以延长前脑缺血模型小鼠存活时间，并进一步探讨5-羟甲基糠醛的作用机制可能与抗氧化应激，提高脑组织清除自由基的酶活力有关。
4 外审专家意见及作者答复：
问题1：实验方法过于简单，仅观察动物存活时间和脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，对于结果的说明充分性不足；建议补充实验，如：小鼠的行为学检测、免疫组织化学、PCR或Western blot检测与神经保护相关的一些指标，可能对于机理的阐述更加明确。
答：对于5-HMF对前脑缺血模型小鼠神经保护作用的研究，作者所在课题组尚在初步探索中。目前研究观察到，对双侧颈总动脉结扎致前脑缺血模型小鼠，预防性和治疗性给予5-HMF均能显著延长小鼠存活时间，说明5-HMF是有一定的神经保护作用的。结合文献5-HMF具有抗氧化清除自由基的作用及5-HMF的分子结构，我们课题组以抗氧化机制为切入点进行SOD活性和MDA水平的检测，来探讨5-HMF神经保护作用机制。实验结果显示，5-HMF能显著提高SOD活性并降低MDA水平，其抗氧化应激作用是神经保护的重要机制之一。此外，作者对本文的标题也进行了修改，明确写出5-HMF抑制氧化应激。
正如专家所说，作者目前的研究深度有待加强，在下一步的实验中，作者所在课题组将根据专家提出的宝贵意见，继续进行相关研究，从多方面阐明5-HMF神经保护作用的机制。
问题2：是否小鼠行2VO后均必死无疑，有待澄清。
答：Gongming Yang 等[1]研究发现，ICR小鼠行双侧颈总动脉结扎后，6h存活率大概在40%，24h存活率大概在10%。但也有研究采用双侧颈总动脉结扎ICR小鼠，以术后1h为最长存活时间记录小鼠存活状况[2]。作者所在课题组进行了多批实验，只有极少数前脑缺血ICR模型小鼠存活时间超过6h，所以选择6h作为最长存活时间记录小鼠存活状况。本批实验结果显示，在治疗性给药实验中，只有5-HMF大剂量组的1只小鼠存活时间超过6h。
[1] Yang G, Kitagawa K, Matsushita K, et al. C57BL/6 strain is most susceptible to cerebral ischemia following bilateral common carotid occlusion among seven mouse strains: selective neuronal death in the murine transient forebrain ischemia.Brain Res.1997,752(1-2):209-218
[2] Nishizawa K, Inoue O, Saito Y, et al. Protective effects of kamikihi-to, a traditional Chinese medicine, against cerebral ischemia, hypoxia and anoxia in mice and gerbils. Jpn J Pharmacol.1994;64(3):171-177
