专家意见:对材料与方法的意见:存在一点问题。免疫组化与RT-PCR取材部位不一致。会导致两种研究方法在相关性上存在缺陷,降低了结果的说服力。另外,免疫组化研究的是神经元的脑红蛋白表达量,RT-PCR研究的是脑组织的脑红蛋白mRNA的转录表达量,然而神经元在脑组织中仅占10%-20%的比例,因而两种研究方法在相关性上也存在瑕疵。
作者回复:1、本实验选取闭合性颅脑创伤模型,前期的研究及预实验提示:该模型致伤情况不同于开放性颅脑创伤模型(一侧致伤、对侧为正常对照),其对双侧大脑半球的损伤是对称的。且取材的前脑、后脑均位于致伤打击区内,对皮层神经元致伤切变力作用方向一致,伤情相当。我们将在后续干预实验研究中采用开放性颅脑损伤模型,实施NGB表达干预后,行双侧大脑半球自身对照。
2、目前的文献报告,生理条件下NGB核酸表达仅见于神经元,而其蛋白表达也可见于损伤神经元周围的反应性胶质细胞。目前的观点认为,在损伤神经元周围胶质细胞检测到的NGB并非是神经胶质细胞自身的NGB核酸或蛋白合成,而是具有膜通透能力的NGB蛋白经由神经元转运至神经胶质细胞内。而且,本研究免疫组化也未见胶质细胞NGB阳性表达。故而,我们考虑脑组织NGB-mRNA定量可代表神经元NGB-mRNA表达情况。