实验设计及文章构思特点
急性脑缺血溶栓治疗所致的再灌注损伤,可导致血脑屏障的渗漏,与血管源性脑水肿形成和出血性转化密切相关。紧密连接对血脑屏障细胞旁渗透性起到重要的调节作用。虽然紧密连接的结构和作用已经明确,然而在脑缺血再灌注早期,紧密连接蛋白的动态变化及其调节机制仍不十分清楚。明胶酶作为细胞外基质重要的降解酶,在血脑屏障破坏中起到重要的作用。因此,本研究中,我们通过多种手段,多种方式来探讨再灌注早期,紧密连接蛋白,claudin-5 和 occludin 表达特点及其与明胶酶表达变化的关系。
本文创新点:
既往对明胶酶,以及claudin-5,occludin的研究,多采用永久性的大脑中动脉闭塞模型,而我们采用局灶性脑缺血再灌注模型,且进行再灌注早期研究,更符合临床治疗的需要,因为临床中随着溶栓的广泛使用以及药物治疗手段的进步,再灌注损伤(或者称为血管闭塞后的循环的重建)将更加的常见,再灌注损伤将会引起血管源性脑水肿甚至出血性的转化,严重的影响预后,因此,早期及时的“关闭”血脑屏障的重要的结构组件(紧密连接蛋白)将更加的重要。
其次,我们对脑纹状体组织进行伊文思兰渗出的量化,而不是缺血的皮质(或者称为缺血半影区)。脑纹状体组织通常被称为“缺血核心”。在临床工作中,大脑中动脉闭塞多影响该区域,是随后的脑水肿,脑出血的常见部位,因此我们针对关键部位claudin-5,occludin进行研究更具有临床意义。
我们对纹状体脑组织进行测定,而不是采用离心的脑微血管内皮细胞,因为最近一项研究发现claudin-5,ZO-1等紧密连接蛋白再灌注期间,可以出现在周围的星形胶质细胞,紧密连接蛋白在整个神经血管单元位置的变化可能对整个细胞旁通透性的改变也可产生重要的影响。所以我们采用纹状体匀浆方式来研究蛋白的变化。
本研究的机制探讨方面,除了单纯的“酶-降解蛋白”这一机制外,还同时探讨了明胶酶对紧密连接蛋白的胞内部分影响,明胶酶同内皮细胞表面受体相互作用,及明胶酶对紧密连接信号调节方面,探讨了明胶酶-紧密连接蛋白二者之间的关系,为今后的研究提供了参考。