1 实验设计构思
新生儿缺氧缺血性脑病临床尚无有效的治疗方法。有学者研究发现新生儿脑组织含不饱和脂肪酸较成人更高,因此更易受脂质过氧化反应的影响。虽有研究显示超氧化物岐化酶制剂及别嘌呤醇等药物应用于脑缺血再灌注大鼠时有脑海马内自由基产物丙二醛水平降低的表现,提示药物的应用能帮助机体减轻脂质过氧化反应的影响。但是,目前尚未有药物被广泛认同具有确切的临床疗效。雌激素作为一种天然的、临床应用成熟的抗氧化剂、神经保护剂,如果在应用于此类模型鼠时发挥良好的清除自由基,保护神经细胞的作用,那么将为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病等疾病过程中由于脂质过氧化引发的一系列“连锁反应”提供一种新的药物选择。
2 专家意见与答疑
1.三组在不同时间点的脑组织缺血坏死情况如何?MDA含量降低,NOS表达增高能否减轻脑组织坏死?这个问题应该在本课题中有所交代。
回复:结合以往学者的研究,提示MDA的含量变化能够间接反映实验动物脂质过氧化反应的程度,这也就间接提示氧化应激中如果组织中MDA含量在干预因素作用下有较明显改变,则组织中受累细胞及受累程度会有改善,本实验通过NOS在细胞的表达间接地支持了实验结果。
2.实验组的MDA在术后48小时达到最低,但是72小时极度增高,后续将发生什么变化?有没有可能继续大幅度增高?研究者在得到这样的数据必须做后续研究。
回复:既往研究结果提示脂质过氧化反应在损伤早期表现最为明显,提示干预因素的给予越早越好,因此本课题在设计过程中将时限控制在了72h以内,但从实验结果反映来看确实提示氧化应激在72h没有明显缓和,接下来的实验如果条件允许我们将就这一问题做进一步的研究。
3.NOS只做了实验组和模型组间的比较,假手术组没有加入比较;文中只提供了实验组和模型组各一张图片和一个统计图。这些资料是从脑的哪个部位获得的,数据如何进行的统计?这些关键性问题都必须补充。建议还要分不同部位进行统计。
回复:文中已补充。各组实验结果取5套切片,采用捷达801系列形态学分析软件计数NOS阳性细胞,每只大鼠取8张切片相应结构平均值(以皮质和纹状体为主)进入统计分析。各组计量资料以均数±标准差( ±s)表示,SPSS 16.0软件单因素方差分析各组间差异,以p<0.05表示有统计学差异。
4.如作者在讨论中所述,本研究中NOS阳性的是什么细胞?这个有必要搞明白!
回复:受实验条件所限本实验中观察的仅是新生鼠给予不同条件后相关脑区氧化应激的表现,接下来的实验如果条件允许我们将就这一问题做进一步的研究。
5.建议要做左右侧半脑之间的比较,右侧只有缺氧没有缺血,左侧是缺血缺氧。
回复:本实验重点观察的是雌激素对新生鼠缺血缺氧后的影响,因此没有仔细观察同只动物左、右侧相关脑区的变化,接下来的实验如果条件允许我们将就这一问题做进一步的研究。
6. 如方法中所述:“假手术组只分离左侧颈总动脉但不结扎,缝合皮肤后不予缺氧处理”。既然如此,为何假手术组MDA还会如此升高??请作出解释!!
回复:非常感谢您的意见和建议,MDA含量呈增高变化推测可能和新生鼠应激反应较成年鼠敏感从而导致机体氧自由基的产生增多有关。
7. 在仅仅注射一次雌激素的情况下,该组MDA数值不仅低于模型组,还远远低于假手术组。能否做出适当解释?
回复:本实验MDA上升明显可能和雌激素的剂量有关,考虑到雌激素在临床应用中出现的副作用等问题,这对我们今后的工作如寻找更为合适的雌激素剂量有极大的帮助。