1 实验设计构思介绍
应用Heteroduplex技术对帕金森病患者,以及对照标本的DNA基因组进行NURR1全基因筛查,异常泳动片段进行亚克隆和DNA测序,确定NURR1基因的多态性分布及频率,关联分析确定有意义突变点(与疾病相关的位点)。提取帕金森病患者及对照组白细胞中总RNA,对NURR1基因mRNA进行Real-time PCR分析,统计分析NURR1基因在帕金森病及对照组的表达水平。
2 国内外同类研究水平的介绍
国外有类似报道,但关于中国人NURR1基因突变尚无报道。国外主要关于家族性帕金森病患者的NURR1基因突变报道,本文主要为散发性患者该基因突变分析。
3 外审专家意见与作者答复
问题1:Nurr1基因外显子3异常电泳片段的突变位点是为711C/A同义突变片段,该位点突变将导致237位异亮氨酸仍为异亮氨酸,是SNP位点,应该不影响功能。另外该测序图没有对应的野生型。
答:Nurr1基因外显子3异常电泳片段的突变位点是为711C/A同义突变片段,该位点突变将导致237位异亮氨酸仍为异亮氨酸,是编码序列,作者证明影响Nurr1功能。
问题2:讨论中叙述“其携带Nutt1基因外显子2和外显子3的 2个错义突变”,应当不是错义突变。
答:Nurr1基因外显子3 的711C/A为错义突变,外显子2突变为多态性,由于位于外现子区,可以理解为SNP。
问题3:结论中仅2.5%和1%的患者存在某一外显子的多态性,其比例极为低,因此,证明其外显子的突变与帕金森病疾病就存在相关性,是否有些牵强?
答:本文主要为基因研究分析,检测帕金森患者的Nurr1基因变异及表达水平,并不是检测该基因是否可以作为本病的生物学标记,所有患者的诊断均采用标准的诊断标准。目前,国际上报道的Nurr1基因突变也是为罕见突变。