中国神经再生研究(英文版) ›› 2022, Vol. 17 ›› Issue (1): 122-129.doi: 10.4103/1673-5374.314310
Alisa A. Shaimardanova, Daria S. Chulpanova, Valeriya V. Solovyeva, Aleksandr M. Aimaletdinov, Albert A. Rizvanov*#br#
摘要:
GM2神经节苷脂病是由β-己糖胺酶A(HexA)酶缺乏引起的严重遗传性神经退行性疾病,导致GM2神经节苷脂在神经元中积聚。(1)实验使用双顺反子慢病毒载体分析了由P2A肽的核苷酸序列(HEXA-HEXB)的HexAα和β亚基基因cDNA双顺反子慢病毒载体介导的基因疗法治疗GM2神经节苷脂病的有效性和安全性;(2)在HEK293T细胞和人脐带血单个核细胞(hUCBMCs)的培养物中分析了含有HEXA-HEXB基因盒的双顺反子构建体的功能;(3)结果表明,与天然细胞的条件培养基相比,基因修饰的HEK293T-HEXA-HEXB和hUCBMCs-HEXA-HEXB的条件培养基中HexA的酶活性分别提高了23和8倍;(4)免疫印迹分析表明,hUCBMCs-HEXA-HEXB分泌了完全分离的HEXA和HEXB蛋白,以及一个未切割的蛋白,其中含有通过P2A肽连接的HEXA + HEXB;(5)向Wistar大鼠静脉内注射转基因的hUCBMCs-HEXA-HEXB后第6和9天,其血浆HexA的酶活性明显增加2.5和3倍,免疫器官脾、胸腺、骨髓、淋巴结的活细胞数量保持不变;(6)体外和体内实验显示了编码由P2A肽的核苷酸序列分隔的HEXA和HEXB基因的cDNA的双顺反子遗传构建体可以恢复GM2神经节苷脂病患者中枢神经系统中缺失酶的活性。静脉内给予HexA过表达的hUCBMC是治疗GM2神经节苷脂病的一种有前途的方法。
https://orcid.org/0000-0002-9427-5739 (Albert A. Rizvanov)