1 本文实验设计构思介绍
①脊髓缺血再灌注损伤是指在损伤因子作用下，脊髓神经经过一定时间缺血后恢复血供，却出现了严重的功能障碍，甚至出现不可逆的脊髓神经元迟发性死亡的现象。因此，我们推测：减少神经细胞凋亡等可以有效减轻脊髓缺血再灌注损伤。
②研究发现HSP70是一种应激保护蛋白，在线粒体上的HSP70可能通过对变性的细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2加以修复或防止其被降解，恢复其凋亡。抑制功能细胞凋亡与基因调控有关:B细胞淋巴瘤/白血病基因-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x（Bax）是重要的细胞凋亡调控基因，前者抑制细胞凋亡，后者促进细胞凋亡。Bcl-2与Bax表达的比值可以提示细胞是否发生凋亡，两者比值增高时促进细胞存活，否则细胞发生凋亡。
③前期的研究表明，丹参酮Ⅱ钠能有效改善脊髓缺血再灌注损伤。鉴于HSP70、Bcl-2、Bax在神经细胞凋亡过程中起着重要的调控作用，本研究拟通过观察丹参酮Ⅱ钠对脊髓缺血再灌注损伤神经细胞凋亡相关蛋白HSP70、Bcl-2、Bax表达的影响，进一步探讨丹参酮Ⅱ钠对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机制。
2 国内外同类研究水平的介绍
中医古籍中无“脊髓缺血再灌注损伤”的病名，缺乏与脊髓缺血再灌注损伤相关疾病的完整记载，主要从病因病机和症状上进行辨证论治。在《灵枢•寒热病》中记载有“人有所堕坠，四肢懈堕不收，名曰体惰”。此句所述的临床症状与脊髓损伤颇为相似，因此可认为“体惰”是对本病的最早病名记载。
《难经•二十八难》记载：“督脉者，起于下极之命，并于脊里，上至风府，属于脑。”由此可见脊髓的解剖学部位与生理功能同祖国医学描述的督脉相似。督脉为阳脉之海，诸阳之会，具有统摄元阳、振奋督率全身阳经的功能，并与任冲二脉、阳维脉皆有联系，故可调节全身的气血，在全身经络系统中处于中心主导地位，这与现代医学所叙述的脊髓作为中枢神经相似。后世医家认为脊髓损伤是因为外力损伤督脉所致脊髓的原发性损伤。而该病属于脊髓的继发性损伤，中医辨证属气虚血亏、血脉瘀阻，乃本虚标实之证[1-2]。督脉总督周身之阳经，督脉受损则致经气不通，气血阻滞，导致阳气不能交会调达于四肢，因而可出现肢体麻木、瘫痪、二便失禁等经络不通的现象，这些症状也与现代医学所述脊髓损伤所致的截瘫相似。后世医家从病因病机及主症将其归入“痿证”、“痿蹙”的范畴，并提出了“痿证无寒”、“治痿独取阳明”等观点，对于指导临床治疗具有重要意义。
吴念先等[3]以祛瘀消肿、补肾助阳、振奋督脉为治则，以健脊复髓汤治疗早期脊髓损伤，取得满意效果。李保林等[4]以补阳还五汤加减，方中重用黄芪益气通络，以助活血化瘀之力；加漏芦清热解毒、通络。通过改善微循环、降低血液粘滞度、提高机体免疫能力、稳定细胞膜等作用，保护尚未受到损伤或已受损伤但尚未死亡的神经细胞免受进一步的继发性损伤，从而保护残存脊髓功能。余杭平等[5]以龙马来自胶囊改善脊髓神经功能。马勇等[6]用脊髓康方阻止脊髓神经继发性损伤等并发症。尚建伟等[7]证明三七总皂苷能减轻脊髓水肿。任宪盛[8]、刘世清[9]证实黄芪对脊髓的修复作用。张可兰等[10]认为当归能促进损伤神经的再生，并为再生神经纤维供应更多血源性营养物质，营养神经因子，提高神经纤维的再生率和成熟度，促进周围神经再生。我们前期的研究发现，脊髓神经细胞凋亡在脊髓缺血再灌注损伤中发挥着重要的作用，减少脊髓神经细胞凋亡可以减轻缺血再灌注过程中对脊髓组织的损伤，丹参酮可明显减轻脊髓缺血再灌注损伤引起的脊髓水肿，维持细胞内钙离子的平衡，减少线粒体释放细胞色素c，抑制半胱氨酸蛋白酶-3的表达，从而减少细胞凋亡，对脊髓缺血再灌注损伤有很好的保护作用[11]。脊髓缺血再灌注损伤中，由cytc-caspase-3介导的凋亡通路均参与了脊髓缺血再灌注后脊髓神经细胞损伤的病理过程，丹参酮对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用可能与抑制Cytc-Caspase-3介导的凋亡通路有关[12]。现已证实，脊髓神经细胞对缺血缺氧非常敏感，比较短暂的脊髓缺血就能引起脊髓运动神经元功能的丧失。迟发性神经细胞凋亡是继发性脊髓损伤导致神经功能障碍的最终共同通路。脊髓细胞受缺血应激，兴奋氨基酸、炎性递质、TXA、自由基等增加，受体、离子通道开放，Ca、IP、蛋白激酶等增加，激活IEGs转录，生成mRNA，翻译生成Fos、Jun等核磷蛋白。二者结合形成异源二聚体，激活蛋白1，重新转位于核内，结合到靶基因HSP70等迟发反应基因的DNA调节区一调节靶基因表达和转录速率，靶基因转录增强或减弱，最后细胞凋亡。
HSP70是一种应激保护蛋白，可抑制应激激活蛋白激酶，并发挥其分子伴侣作用，在线粒体上的HSP70可能通过对变性的细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2加以修复或防止其被降解，恢复其凋亡抑制功能[13]。Sateh等[14]发现HSP70能阻止细胞色素-c、apaf-1复合体与caspase-9的相互作用，从而阻断细胞凋亡过程。已有研究表明，在正常的脊髓组织中，不存在或很少存在HSP70的常规表达[15]。
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[5]余杭平，王维佳，章明，等. 复方龙马自来胶囊治疗兔脊髓损伤的实验研究. 中医正骨,1999,11(6)：51
[6]马勇，吴毛，王建伟. 脊髓康治疗脊髓损伤28俐。辽宁中医杂志，2004,31(4)：309
[7]尚建伟，孔抗美，齐伟力，等. 三七总皂苷对大鼠脊髓损伤的实验研究.汕头大学医学院学报，2005,18(4)：200
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3 本文与其他同类研究的比较
针对脊髓缺血再灌注损伤的中药运用大多处于实验阶段。我们的前期研究已证明：病理状态下NMDA-Ca2+-NO路径介导的神经元毒性是导致脊髓缺血再灌注损伤的关键，活血化瘀中药的作用与神经损伤病理变化具有针对性效应。采用活血化瘀等方法对脊髓缺血再灌注损伤具有一定疗效，然而，该损伤造成神经功能损害引发截瘫和肢体功能延迟性恢复仍然亟待解决。
理论上从整体入手，补肝肾，强督脉，生新髓能通神经，兴奋滋养强壮修复脊髓神经。临床上应用丹参酮Ⅱ钠修复脊髓神经疗效肯定，但是否通过调节神经细胞凋亡通路HSP70、Bcl-2、Bax尚未明确。
本实验通过进一步研究丹参酮Ⅱ钠治疗脊髓缺血再灌注损伤的机制，对中药的临床应用提供依据，开拓中药治疗的前景广阔。
4 本文先进性、创新性及其特色
本文首次探讨丹参酮Ⅱ钠对脊髓缺血再灌注损伤的迟发性神经细胞凋亡通路HSP70、Bcl-2、Bax表达水平的影响，为中医药防治脊髓缺血再灌注损伤提供新的着眼点。
