1实验设计构思介绍
本研究通过观察正常组和急性脑梗死患者的血小板及高尔基体的微观结构,血小板α颗粒数量变化及其分布定位与高尔基体的关系 , 并通过流式细胞术研究高尔基体对血小板CD40L 表达的影响,来探讨急性脑梗死后血小板高尔基体的形态变化及其意义, 以及高尔基体对血小板表达CD40L的影响。
2 国内外同类研究水平的介绍
本课题组前期研究发现, 短暂性脑缺血后神经细胞高尔基体发生了明显的形态变化。White 等发现血小板无力症患者的血小板高尔基体形态和数量也发生了明显的改变。脑梗死患者血中可溶性CD 40L ( sCD40L ) 表达明显增高, CD40L在血栓形成中发挥重要作用。正常血小板胞浆内存在CD40L, 当血小板活化后由胞内转移至胞膜并释放, 研究发现血中可溶性CD40L有95%来自活化的血小板。
3与其他同类研究的比较
对高尔基体与脑梗死损伤,高尔基体与血小板之间的关系经行研究,血小板高尔基体是否与急性脑梗死有关, 国内外无相关研究报道。CD 40L由血小板内转移至胞膜的具体途径不详, 高尔基体是否参与血小板CD40L的表达, 尚无研究报道。
4 文章创新性
检索pubmed以及cnki数据库,检索时间为2012年,检索时间范围为近10年。检索关键词为golgi,platelet,cerebral infarction,CD40L.相关文献数量为49篇。
5 专家意见与答疑
专家意见1:试验样本介绍不完整:比如,缺血性中风患者1,7,15天采血时是否经过治疗?所有患者治疗方案是否一致?有否用过抗血小板聚集药物如阿司匹林?服药是否会对实验结果有干预?
作者答疑:发病24h内采血,其后予以统一的急性脑梗死常规治疗,再于第7,15天采血(已在文中method第一段修改)。有用阿司匹林,服药对结果可能有干扰,但临床上脑梗死患者必须使用阿司匹林治疗,且实验中观察到以第1天的血小板及高尔基体改变最明显,该天尚未用药治疗。
专家意见2:图4对照组观察不到聚集的α颗粒吗?TGN 46不是高尔基体的分子标志吗? 胶体金所标记的不应该是高尔基体吗?怎么又成了α颗粒聚集?图中给出的胶体金也没有标记上,第一张图片右下角处也可看到大量的胶体金,此处并没有α颗粒或高尔基体
作者答疑:对照组的α颗粒数量较脑梗死后多(表1中有数据可证明),均匀分散存在。胶体金标记的是高尔基体,α颗粒是聚集在高尔基小管附近。脑梗死后α颗粒减少,图中表示有少量的α颗粒聚集在高尔基体小管及囊泡附近。