中国神经再生研究(英文版) ›› 2022, Vol. 17 ›› Issue (1): 163-169.doi: 10.4103/1673-5374.314313
Wei-Na Chai, Yi-Fan Wu, Zhi-Min Wu, Yan-Feng Xie, Quan-Hong Shi, Wei Dan, Yan Zhan, Jian-Jun Zhong, Wei Tang, Xiao-Chuan Sun*, Li Jiang*#br#
摘要:
有研究发现下调Neat1可能对小鼠神经功能的恢复产生不利影响,也可能导致小鼠海马神经元丢失增加,而Neat1是否对继发性脑损伤后神经元细胞的凋亡有保护或抑制作用,目前尚无定论。为此,实验观察了Neat1对神经元凋亡的影响。通过体外培养C57BL/6新生鼠皮质原代神经元,并建立氧糖剥夺细胞模型来体外模拟创伤性脑损伤后继发性脑损伤,通过构建重组腺病毒来感染神经元来调控神经元细胞Neat1基因表达的水平,以观察调控Neat1的表达对氧糖剥夺后神经元凋亡的影响。(1) 实验分4组:对照组无任何处理正常培养、氧糖剥夺组为仅进行氧糖剥夺建模、Neat1过表达组和Neat1下调组分别在氧糖剥夺神经元进行上调和下调Neat1表达的干预。用Western-Blot检测各组神经元PIDD1(促凋亡蛋白)、caspase-2(凋亡启动蛋白)、细胞色素C(促凋亡蛋白)和cleaved caspase-3(凋亡执行蛋白)的蛋白表达水平。此外,为了观察细胞色素C在细胞内的分布改变,用Western Blot法分别检测了各组神经元中胞浆和线粒体中细胞色素C的表达。此外,用CCK-8和TUNEL分别检测各组细胞活力和凋亡率的差异;(2)结果发现,与氧糖剥夺组相比,Neat1过表达组神经元的凋亡率、PIDD1、caspase-2和cleaved caspase-3的表达水平显著降低,细胞活力明显提高,但Neat1下调组可逆转上述变化。此外,与Neat1下调组相比,Neat1过表达组神经元细胞胞浆细胞色素C水平明显降低,线粒体细胞色素C水平明显升高;(3)上述数据证实,上调Neat1抑制PIDD1-caspase-2通路,减少细胞色素C从线粒体向胞浆的释放,进而减少caspase-3的活化,减少氧糖剥夺后的神经元凋亡,对创伤性脑损伤后继发性脑损伤有抑制作用。
https://orcid.org/0000-0002-2407-3672 (Li Jiang); https://orcid.org/0000-0001-6992-332X (Xiao-Chuan Sun)