1. 国内外研究状况的微观分析：
视网膜是高度分化的神经组织，是脑组织的延续，视网膜与大脑同样对缺血缺氧十分敏感。早产儿视网膜病变是婴幼儿致盲的重要原因，给患儿和家属带来巨大的痛苦和经济负担，因此，预防和治疗早产儿视网膜病变具有重要的意义。早产儿视网膜病变的确切病因尚未明确，目前尚不能用任何一个单一的病因解释。早产婴儿其周边视网膜血管尚未发育，存在着血管未发育区域。这是早产儿视网膜病的发病基础。目前研究认为早产儿视网膜病变的产生与“相对缺氧”有关。目前大量的研究均表明，视网膜新生血管形成在早产儿视网膜病变的发病过程中起主导作用，而新生血管形成是一个极其复杂的病理生理过程，其间受多种因子的调节，其中，血管内皮生长因子起到最关键的作用。在血管生成发展过程中,除血管内皮生长因子外，Notch信号通路在其中的调控作用也非常重要。Notch信号传导通路广泛存在于脊椎和无脊椎动物中，在进化上具有高度的保守性。Notch受体与配体结合并活化Notch信号传导,从而调控细胞分化和组织的发生，其中包括血管发生。研究显示血管内皮生长因子和Notch信号传递途径参与诱导和挑选尖端细胞的过程，其中，相临细胞间Delta样配体4激活Notch信号在生理性和病理性的血管新生过程中起着关键性的作用。除血管内皮生长因子外，Delta样配体4基因是目前发现的另一可因半剂量等位基因缺失而使动物在胚胎期死亡的基因，Notch信号系统在肿瘤血管发生和胚胎发育中已经证实，Delta样配体4 在正常血管发生过程中是必不可少的。同时，近期的研究显示Delta样配体4-Notch信号同样参与大鼠视网膜血管发育过程。但Delta样配体4-Notch信号在早产儿视网膜病变中的作用还有待进一步探讨。因此实验旨在观察Delta样配体4在大鼠早产儿视网膜病变模型中的表达情况及玻璃体腔注射Delta样配体4单抗抑制Delta样配体4表达后观察视网膜病变的改变情况，推测Delta样配体4-Notch 信号在早产儿视网膜中的潜在功能。
2. 所投文章创新性的分析：
1. 国内外首次探讨Delta样配体4在大鼠早产儿视网膜病变模型中的表达情况
2. 通过玻璃体腔注射Delta样配体4单抗抑制Delta样配体4后，观察视网膜病变的变化，推测Delta样配体4的潜在功能。
3. 文章将进一步证实Delta样配体4-Notch信号通路在视网膜新生血管形成过程中的作用，为视网膜新生血管疾病的防治提供理论依据。
4. 文章不仅将丰富早产儿视网膜病变的发病机制的理论基础，而且Delta样配体4作为新的治疗靶点可能为视网膜新生血管的治疗带来新的方法，为新药的开发提供提供实验室基础。
与近3年文献的对比：
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文献
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材料
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方法
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结论
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Phng LK, Potente M, Leslie JD,et al. Nrarp coordinates endothelial Notch and Wnt signaling to control vessel density in angiogenesis. Dev Cell. 2009 Jan;16(1):70-82.
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小鼠
斑马鱼
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免疫组化
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Delta样配体4-Notch信号和血管内皮生长因子共同调控尖端细胞出芽进一步形成血管网，Notch和Wnt信号之间的平衡决定了血管网是否能正确形成。
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Rocha SF, Lopes SS, Gossler A,et al. Dll1 and Dll4 function sequentially in the retina and pV2 domain of the spinal cord to regulate neurogenesis and create cell diversity. Dev Biol. 2009 Apr 1;328(1):54-65.
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小鼠
(胚胎视网膜和脊髓)
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免疫组化和原位杂交
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Delta样配体4在胎鼠视网膜和脊髓PV2区域DLL1与Delta样配体4共同表达，Delta样配体4具有促进神经细胞分化，维持神经元多样性的功能
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Benedito R, Roca C, Sörensen I, et al. The notch ligands Dll4 and Jagged1 have opposing effects on angiogenesis. Cell. 2009 Jun 12;137(6):1124-35.
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突变小鼠（胚胎，出生后1-7天的视网膜）
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免疫组化和原位杂交、qRT-PCR
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Notch与Delta样配体4/ Jagged1之间的相互作用在视网膜血管生成时调控尖端细胞和茎细胞之间形成适当的比率起着重要作用
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Dong X, Wang YS, Dou GR,et al. Influence of Dll4 via HIF-1α-VEGF signaling on the angiogenesis of choroidal neovascularization under hypoxic conditions. PLoS One. 2011 Apr 19;6(4):e18481.
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恒河猴 脉络膜内皮细胞（RF/6A），RPE细胞，激光诱导的大鼠脉络膜新生血管模型
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实时定量和半定量RT-PCR，蛋白印迹，免疫荧光
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Delta样配体4参与缺氧时脉络膜新生血管生成过程。
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Outtz HH, Tattersall IW, Kofler NM,et al. Notch1 controls macrophage recruitment and Notch signaling is activated at sites of endothelial cell anastomosis during retinal angiogenesis in mice. Blood. 2011 Sep 22;118(12):3436-9. Epub 2011 Jul 27.
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免疫模型小鼠
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免疫组化
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视网膜巨噬细胞位于Delta样配体4活跃的尖端细胞核血管分支点之间，并且这些巨噬细胞能够活跃Notch信号。
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Stenzel D, Franco CA, Estrach S,et al. Endothelial basement membrane limits tip cell formation by inducing Dll4/Notch signalling in vivo. EMBO Rep. 2011 Oct 28;12(11):1135-43. doi: 10.1038/embor.2011.194.
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转基因小鼠视网膜
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免疫组化
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适当的层粘连蛋白/整合素介导的信号，对于诱导Delta样配体4生理水平的表达是必要的，并且能够在血管出芽过程中调节分支密度。
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本文
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大鼠视网膜
（早产儿视网膜病变模型）
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免疫组化、蛋白印迹、半定量RT-PCR
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Delta样配体4在正常大鼠视网膜发育及早产儿视网膜病变新生血管生成过程中均发挥重要作用，可能具有抑制新生血管过度形成的潜在功能
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3. 所投文章区别于他人他篇的特点：
（1）首次应用了大鼠早产儿视网膜病变模型进行研究。
（2）在视网膜观察时使用了ADP酶染色，相对于高相对分子质量荧光素右旋糖苷灌注法在灌注过程中容易压力过大,引起血管破裂,从而发生血管渗漏的假阳性。实验采用ADP酶组织化学法,能显示所有血管,包括新生血管丛,同时组织形态可以保存1～2周,更适宜于研究新生血管形成的发病机制及其抑制剂在治疗早产儿视网膜病变中的作用。并通过HE染色切片和ADP酶铺片两种方法共同炎症视网膜新生血管的严重程度，更加准确可信。
（3）Lobov等通过对氧诱导视网膜病变模型的研究[Lobov IB, Renard RA, Papadopoulos N, et al. Delta-like ligand 4 (Dll4) is induced by VEGF as a negative regulator of angiogenic sprouting. Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104:3219-3224.]，发现抑制Delta样配体4-Notch信号显著增加血管萌芽并促使更密集的毛细血管网形成，氧诱导视网膜病变模型17日龄小鼠视网膜无血管区面积较对照组减小。而本文中通过对视网膜铺片统计视网膜新生血管象限数结合HE切片计数突破视网膜内界膜内皮细胞核数来评价病变程度，发现，虽然抑制Delta样配体4能够使视网膜血管密度增加，无血管区面积相对变小，但是，新生血管的数量是增加的，因为可以认为Delta样配体4具有抑制新生血管过度生成的作用，这与之前的大量研究一致。
4 研究的特点和创新性：
实验是首次观察在大鼠早产儿视网膜病变模型中Delta样配体4及Notch1的表达变化，并通过Delta样配体4单克隆抗体玻璃体腔注射阻断Delta样配体4-Notch信号通路观察早产儿视网膜病变大鼠视网膜的病理学改变，并探讨Delta样配体4-Notch信号通路与视网膜新生血管发生之间的相关性。本课题立题新颖，设计科学合理，是对国内外相关研究的拓展。本研究不仅丰富了早产儿视网膜病变发病机制的理论基础，也进一步论证了Delta样配体4-Notch信号在视网膜新生血管中的作用，为视网膜新生血管疾病的研究提供新的思路，不仅具有重要的理论价值，通过进一步的系列研究，将来有可能应用于临床治疗工作，为视网膜新生血管疾病的治疗带来新的希望。
