中国神经再生研究(英文版) ›› 2018, Vol. 13 ›› Issue (7): 1216-1224.doi: 10.4103/1673-5374.235059
Ting Wang1, 2, Qun Cai3, Wen-Jie Yang4, Hai-Hua Fan4, Jian-Feng Yi4, Feng Xu1
摘要:
脓毒症脑病是脓毒症常见并发症之一,但关于微小RNA(microRNA, miRNA)在脓毒症脑病中的研究还是很少。实验通过在大鼠海马神经元中转染miR-219模拟物(mimic)来过表达miR-219,观察miR-219对125 μM谷氨酸诱导的大鼠海马神经元毒性的保护作用,并阐述其作用机制。利用实时定量PCR(qRT-PCR)检测谷氨酸诱导海马神经元中miR-219和CaMKⅡγ mRNA的表达。海马神经元中转染miR-219模拟物(mimic)后,MTT和流式细胞仪分析法检测miR-219对谷氨酸诱导的海马神经元细胞活力和细胞凋亡的影响。利用荧光素酶报告基因系统检测CaMKⅡγ是miR-219作用靶基因。利用Western blot和挽救实验来检测CaMKⅡγ的表达,并进一步验证miR-219在海马神经元中是通过调控CaMKⅡγ来发挥作用。MTT和qRT-PCR结果显示,海马神经元细胞活力和miR-219表达在谷氨酸刺激的海马神经元中显著下降,但是CaMKⅡγ mRNA的表达却显著上升。MTT,流式细胞仪分析法和caspase-3活性分析结果显示,过表达miR-219能够提高谷氨酸诱导所引起的细胞活力,降低细胞凋亡率和caspase-3活性。荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-219 mimic转染组中荧光素酶的活性显著降低。挽救实验结果说明,过表达CaMKⅡγ可以逆转miR-219的生物学效应。上述结果数据说明,谷氨酸诱导的大鼠海马神经元中miR-219表达下调,CaMKⅡγ是miR-219作用靶基因,miR-219能够通过负调控CaMKⅡγ来减轻谷氨酸诱导的神经元兴奋性毒性作用。
orcid:0000-0002-1496-9141(Feng Xu)