构建人视网膜神经营养因子质粒对视网膜色素上皮细胞活力的影响

doi:10.4103/1673-5374.197142

摘要/Abstract

摘要：

脑源性神经营养因子对视网膜色素变性的保护功能已成为视神经研究中的热点。然而目前并无适用于临床治疗视网膜色素变性的脑源性神经营养因子制剂。为此，实验构建了人视网膜来源的脑源性神经营养因子真核表达质粒，转染293T细胞，并使其高表达具有生物活性的脑源性神经营养因子，将高表达的脑源性神经营养因子(50 ng/mL)作用于人急性视网膜色素上皮19细胞(ARPE-19)共培养96 h。MTT实验显示，人ARPE-19细胞存活能力显著增强；Western blot检测显示，人ARPE-19细胞内促凋亡蛋白Bax水平下调，抗凋亡蛋白Bcl-2水平上调。实验成功构建了人视网膜来源的脑源性神经营养因子真核表达质粒，将其转染293T细胞可稳定释放活性脑源性神经营养因子，该因子可抑制人视网膜色素上皮细胞的凋亡，未来有希望用于开发其治疗产品。

orcid: 0000-0002-4611-4386 (Gen-lin Li)

关键词: 神经再生, 神经退行性变, 脑源性神经营养因子, 视网膜色素变性, 视网膜, 视网膜色素上皮, 生物合成, 转染, 质粒, 绿色荧光蛋白, 凋亡, 细胞存活

Abstract: Several studies have investigated the protective functions of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in retinitis pigmentosa. However, a BDNF-based therapy for retinitis pigmentosa is not yet available. To develop an efcient treatment for fundus disease, an eukaryotic expression plasmid was generated and used to transfect human 293T cells to assess the expression and bioactivity of BDNF on acute retinal pigment epithelial-19 (ARPE-19) cells, a human retinal epithelial cell line. Afer 96 hours of co-culture in a Transwell chamber, ARPE- 19 cells exposed to BDNF secreted by 293T cells were more viable than ARPE-19 cells not exposed to secreted BDNF. Western blot assay showed that Bax levels were downregulated and that Bcl-2 levels were upregulated in human ARPE-19 cells exposed to BDNF. Furthermore, 293T cells transfected with the BDNF gene steadily secreted the protein. Te powerful anti-apoptotic function of this BDNF may be useful for the treatment of retinitis pigmentosa and other retinal degenerative diseases.

Key words: nerve regeneration, neurodegenerative disease, brain-derived neurotrophic factor, retinitis pigmentosa, retina, retinal pigment pithelium, biosynthesis, transfection, plasmids, green ?uorescent protein, apoptosis, cell survival, neural regeneration

. 构建人视网膜神经营养因子质粒对视网膜色素上皮细胞活力的影响 [J]. 中国神经再生研究(英文版), 2016, 11(12): 1981-1989.

Bo-jing Yan, Zhi-zhong Wu, Wei-hua Chong, Gen-lin Li. Construction of a plasmid for human brain-derived neurotrophic factor and its effect on retinal pigment epithelial cell viability [J]. Neural Regeneration Research, 2016, 11(12): 1981-1989.

参考文献

引言

出版重点

《中国神经再生研究（英文版）》杂志为SCI、PubMed数据库收录的国际唯一一本专注神经再生领域研究的经同行评议的开放获取期刊，出版来自全球神经再生领域专业学者的前沿性基础研究及临床研究及转化医学、循证医学优秀的最新成果。

期刊出版来自于脑损伤与神经再生、脊髓损伤与神经再生、周围神经损伤与神经再生和神经退行性病与神经再生、神经影像与神经再生的相关研究。期刊关注神经损伤与再生过程中的轴突再生、突触生长、神经可塑性、神经修复和替代、神经移植等最新研究成果。尤其关注应用细胞治疗、基因治疗、生物因子治疗、药物治疗、手术治疗、康复治疗、物理疗法、组织工程、生物工程、生物材料、神经假体等干预性方法产生神经再生效果的相关研究。文章应清晰描述抑制神经元损伤、减轻神经元损伤的一系列变化，保护损伤神经元的过程、方法、程度与评价，突出从细胞分子水平以及分子生物学水平解释神经元损伤后以及预后再生的机制。

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美国生物学文摘数据库（BIOSIS previews, BP）

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中国科学引文数据库（CSCD）

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讨论

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引言：

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总结：

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主体内容：

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参考文献：不超过 5条，采用Journal of Neuroscience格式。

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主体内容：

利益冲突：

参考文献：不超过 5条，采用Journal of Neuroscience格式。

文章快阅

延伸阅读

脑源性神经营养因子可减轻视网膜神经节细胞凋亡的研究早已证实。然而目前并无适用于临床治疗视网膜色素变性的脑源性神经营养因子的制剂。来自中国北京同仁医院闫博靖团队在其一项最新研究中构建了人视网膜组织来源的脑源性神经营养因子真核表达质粒，转染293T细胞，使其高表达具有生物活性的脑源性神经营养因子，然后再将高表达具有生物活性的脑源性神经营养因子(50 ng/mL)与人急性视网膜色素上皮19细胞进行共培养96 h。经MTT实验显示，人急性视网膜色素上皮19细胞存活能力显著增强；经Western blot检测显示，人急性视网膜色素上皮19细胞内促凋亡蛋白Bax水平下调，抗凋亡蛋白Bcl-2水平上调，说明此高浓度的脑源性神经营养因子(50 ng/mL)对人急性视网膜色素上皮19细胞的抗凋亡保护作用更有效。闫博靖等成功构建的可治疗视网膜色素变性的脑源性神经营养因子制剂，旨在为视网膜色素变性的治疗提供新方向。文章研究成果发表在《中国神经再生研究（英文版）》杂志2016年12月第12期。

Article: "" Construction of a plasmid for human brain-derived neurotrophic factor and its effect on retinal pigment epithelial cell viability,"" by Bo-jing Yan, Zhi-zhong Wu, Wei-hua Chong, Gen-lin Li (Beijing Tongren Eye Center, Beijing Tongren Hospital, Capital Medical University, Beijing Ophthalmology & Visual Sciences Key Lab, Beijing, China) Yan BJ, Wu ZZ, Chong WH, Li GL (2016) Construction of a plasmid for human brain-derived neurotrophic factor and its effect on retinal pigment epithelial cell viability. Neural Regen Res 11(12):1981-1989.

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